文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 蜱和实验动物

    1.1.2 质粒与菌株

    1.1.3 试剂

    1.1.4 主要仪器

1.2 方法

    1.2.1 蜱的总RNA提取及反转录

    1.2.2 引物设计与目的基因的扩增

    1.2.3 原核表达载体的构建

    1.2.4 蛋白特性预测

    1.2.5 rHasFer2和rHanFer2 的表达及纯化

    1.2.6 免疫试验

    1.2.7 SDS-PAGE和Western blot分析

2 结果

2.1 原核表达载体的构建

2.2 蛋白特性预测结果

2.3 rHasFer2和rHanFer2的表达、纯化及免疫印迹

3 讨论

文章摘要:铁蛋白2（ferritin 2,Fer2）是一类储存铁的蛋白,在蜱生理活动中起到解毒作用,是一种抗蜱疫苗候选抗原。利用原核表达系统,分别对亚洲璃眼蜱（H.as）和小亚璃眼蜱（H.an）Fer2基因进行了克隆、表达以及蛋白特性预测,为挖掘抗蜱疫苗候选抗原奠定基础。提取H.as和H.an总RNA,并反转录为cDNA,以此为模板克隆、表达出重组蛋白rHasFer2和rHanFer2,并分别用尿素透析法和亲和层析柱对2个重组蛋白进行了纯化;应用Western blot分析蛋白的反应原性;用Prot Param、TMHMM、SignalP-5.0、Antibody Epitope Prediction及SWISS-MODEL等软件对HasFer2和HanFer2序列进行蛋白特性预测。构建了重组质粒pGEX-4T-1/HasFer2和pET-28a/HanFer2,rHasFer2和rHanFer2均以包涵体形式表达,Western blot分析结果表明,2种蛋白可与相应阳性血清发生特异性反应。蛋白特性预测分析表明,HasFer2无跨膜区,不属于跨膜蛋白,分子质量为21.908 ku,等电点为5.542,主要存在于胞外（66.7%）和分泌系统的囊泡（22.2%）;HanFer2有跨膜区,分子质量为23.033 ku,等电点为6.29,主要分布于胞质（34.8%）和胞外（26.1%）;2种蛋白均有较高的抗原性,存在信号肽区域,均无T细胞表位,成功构建了蛋白3D模型。研究结果为探究Fer2在H.as和H.an中发挥的功能及抗蜱亚单位疫苗研制奠定了基础。

文章关键词:

论文DOI:10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.11.003

论文分类号:S852.746