文章摘要:本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒（VSV-IN）和新泽西型水泡性口炎病毒（VSV-NJ）的G基因，然后将其连接到克隆载体pMD19-T上，构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G 和pMD-VSV-NJ-G。根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物，利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量RT-PCR，建立标准曲线，并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果，在拷贝数6.82～6.82×10⁸ copies/μL范围内，C_t值与质粒拷贝数的对数值呈良好的线性关系，pMD-VSV-IN-G标准曲线的R²值为 0.998 12，pMD-VSV-NJ-G标准曲线的R²值为0.997 48；检测其他病毒均无特异性扩增曲线，特异性良好。pMD-VSV-IN-G的检测灵敏度为6.82 copies/μL，pMD-VSV-NJ-G的检测灵敏度也为6.82 copies/μL，是普通RT-PCR方法的10倍。用该方法对实验室保存的VSV-IN和VSV-NJ各5份攻毒小鼠样品进行检测，检测结果与普通RT-PCR检测一致。上述结果表明，本检测方法的建立对快速、灵敏鉴别诊断IN型和NJ型水泡性口炎病毒具有重要的应用价值。

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